Trang: 259
Tập 27, số 11 2017
Ứng dụng phương pháp RT-PCR để nhận dạng vi rút viêm gan A trong các loại vắc xin viêm gan A
Application of RT-PCR method for identification of Hepatitis A virus in Hepatitis A vaccine
Tác giả: Lưu Thị Dung, Đoàn Hữu Thiển, Nguyễn Thị Lý, Nguyễn Thị Hồng Định, Phạm Văn
Hùng
Tóm tắt:
Nghiên cứu ứng dụng phương pháp RT-PCR (Reverse transcription - Polymerase Chain Reaction) để
xác định sự có mặt của vi rút viêm gan A trong các loại vắc xin viêm gan A nhằm xây dựng một quy trình
nhận dạng chung cho các loại vắc xin viêm gan A. Các vắc xin viêm gan A được lựa chọn để tiến hành thử
nghiệm gồm: 2 loại vắc xin nhập khẩu là Avaxim, Epaxal và vắc xin Havax được sản xuất trong nước. Kết
quả cho thấy: Các chủng vi rút viêm gan A được phát hiện có trong vắc xin bởi sản phẩm của phản ứng
RT-PCR được tạo thành với cặp mồi đặc hiệu để khuếch đại đoạn gen C-VP3 kích thước 206 nucleotit.
Trước khi tiến hành phản ứng RT-PCR, cần phải tiến hành loại bỏ nhôm và các thành phần tham gia phản
ứng RT-PCR như sau: 5μl dung dịch đệm (master mix), 5 μl H2O, 1,25 μl dNTP, 1,25 μl mồi xuôi và mồi
ngược, 1,25 μl enzyme, 5μl dung dịch Q , 5μl ARN khuôn và chu trình chạy: 50°C 30 phút, 95°C 15 phút,
94°C trong 1 phút, 48°C trong 1 phút, 72°C trong 2 phút, 72°C 10 phút, 40 chu kỳ.
Summary:
RT-PCR (Reverse Transcription-
Polymerase Chain Reaction) method is applied
to determine to presence of hepatitis A virus in
hepatitis A vaccines and to develop a generic
identity process for hepatitis A vaccines. There
are 3 hepatitis A vaccines selected in this test
including 2 imported vaccines (Avaxim and
Epaxal) and Havax (a domestic production).
Hepatitis A virus strains was detected in the
results of RT-PCR product which was formed
with specific primers to amplify the 206
nucleotide C-VP3 gene fragment. Before the
performance of RT-PCR, aluminum should be
removed and the components of RT-PCR are
listed as follow: 5μl Master mix buffer, 5 μl
H2O, 1.25 μl dNTP, 1.25 μl forward primer,
1.25 μl reverse primer, 1.25 μl enzyme, 5 μl
Q solution, 5 μl ARN Template, and cycle of
reaction was 500C in 30 minutes, 950C in 15
minutes, 940C in 1 minute, 480C in 1 minute,
720C in 2 minutes, 720C in 10 minutes for 40
cycles.
Từ khóa:
Viêm gan A , phản ứng RT-PCR, vắc xin
Keywords:
Hepatitis A virus, vaccine, RT-PCR.
File nội dung:
o1711259.pdf
Tải file:
